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              活性試劑盒使用注意事項

              發布時間: 2022-06-22  點擊次數: 25次
                活性試劑盒是一種利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。
               
                活性試劑盒對于刺激時間較短(通常為2小時以內)的細胞,先裝載探針,后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞。對于細胞刺激時間較長(通常為6小時以上)的細胞,先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞,后裝載探針。
               
                細胞凋亡可通過兩種起始途徑啟動,內始式途徑由非受體刺激激活,如DNA損傷、內質網應激、代謝應激,線粒體外膜通透性改變,如細胞色素c釋放,外源途徑通過死亡受體與配體結合開始。
               
                對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察,或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。對于收集細胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測,也可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。
               
                注意事項:
               
                1、盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間(刺激時間除外),以減少各種可能的誤差。
               
                2、探針裝載后,一定要洗凈殘余的未進入細胞內的探針,否則會導致背景較高。
               
                3、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
               
                4、探針裝載完畢并洗凈殘余探針后,可以進行激發波長的掃描和發射波長的掃描,以確認探針的裝載情況是否良好。
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